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SILVA, Herika Daiane da. Virulência de bactérias associadas a Azadirachta indica sobre Spodoptera frugiperda. 2014. 71 p. Dissertação (Mestrado em Produção Vegetal no Semiárido) – Universidade Estadual de Montes Claros, Janaúba, 2014.
A lagarta do cartucho-do-milho, Spodoptera frugiperda (J.E Smith), é considerada um inseto-praga de grande importância econômica para a agricultura, devido aos danos causados a diversas culturas. Este trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar a virulência de bactérias isoladas da planta nim, Azadirachta indica A. Juss, sobre a biologia S. frugiperda. Os isolados bacterianos avaliados foram Epi 1, Epi 7, Epi 9,Epi 11, Epi 12, Epi 13, Nim 5, Nim 8, Nim 10, Nim 11, Nim 12, Nim 14 e Nim 15 que foram obtidos a partir de extratos fermentados de nim (Nim) e da superfície das folhas desta planta (epifíticos - Epi). Estes isolados foram repicados em meio de cultura solido TSA. As suspensões bacterianas foram preparadas a partir da adição de solução salina (NaCl a 0,85%) às placas contendo as bactérias multiplicadas. Estas suspensões foram centrifugadas durante 15 minutos, em rotação de 10.000 rpm. Os sobrenadantes obtidos foram reservados e armazenados em novos frascos e às células bacterianas foi acrescentado um volume variável de solução salina, dependendo do ensaio a ser realizado e do isolado avaliado, para ajuste das concentrações. Este procedimento foi realizado em espectrofotômetro calibrado para 540 nm de densidade óptica. Inicialmente, foi avaliado o efeito da ingestão de anticontaminantes, componente da dieta artificial dos parentais de lagartas de S. frugiperda sobre a patogenicidade dos isolados bacterianos Epi 7, Epi 11, Epi 13 e Nim 11. As suspensões bacterianas foram ajustadas em espectrofotômetro para a absorbância 0,1, e utilizadas para tratar fragmentos de folhas novas do cartucho do milho. Estes fragmentos foram oferecidos, de forma individualizada para lagartas recém-eclodidas de S. frugiperda, provenientes de parentais criados em dieta artificial ou em folhas de milho. As lagartas da testemunha também foram provenientes de parentais alimentados com dieta artificial ou folhas de milho e, alimentadas no ensaio, com folhas de milho não tratadas. Foram avaliadas a duração e mortalidade larval e pupal, peso de pupas macho e fêmea e deformação de pupas e adultos. A ingestão de folhas de milho ou de dieta artificial pelos parentais de S. frugiperda não afetou a patogenicidade dos isolados bacterianos avaliados. Na sequência foi determinado o número de células bacterianas presentes em cada uma das suspensões bacterianas avaliadas. Foram avaliados ainda, os sobrenadantes e as células bacterianas provenientes da centrifugação das suspensões. Estes dois componentes foram utilizados para a imersão de fragmentos de folhas de milho, em dois ensaios realizados individualmente. Para os dois ensaios, os fragmentos de folhas tratados foram transferidos para tubos de vidro, juntamente com uma lagarta recém-eclodida de S. frugiperda. As lagartas da testemunha receberam folhas de milho não tratadas. Foram avaliadas a duração e mortalidade larval e pupal, peso de pupas macho e fêmea e deformação de pupas e adultos. Todos os isolados bacterianos avaliados afetaram a sobrevivência e a biologia das lagartas recém-eclodidas de S. frugiperda, entretanto, Epi 13 e Nim 14 foram os mais virulentos a este inseto. Os sobrenadantes dos isolados Epi 1, Epi 7, Epi 12, Epi 13, Nim 11, Nim 12, Nim 14 e Nim 15 reduziram a sobrevivência das lagartas de S. frugiperda. As bactérias isoladas da planta nim são promissoras para serem utilizadas em programas de manejo de lagartas de S. frugiperda.
Palavras-chave: Lagarta-do-cartucho do milho, controle microbiano, nim
Virulence of bacteria associated to Azadirachta indica on Spodoptera frugiperda
The armyworm the corn, Spodoptera frugiperda (JE Smith), is considered a pest insect of large economic importance for agriculture, due to damage to different cultures. This study aimed to evaluate the virulence of bacteria isolated from the neem plant, Azadirachta indica A. Juss, on the biology of S. frugiperda. The evaluated bacterial isolates were 1 Epi, Epi 7, 9 Epi, Epi 11, Epi 12, Epi 13, 5 Nim, Nim 8, 10 Nim, Nim 11, Nim 12, Nim 14 and Nim 15 which were obtained from fermented neem extracts (Neem) and the surface of the leaves of that plant (epiphytic - Epi). These isolates were sub cultured in TSA solid medium (40 g Tryptic Soy Agar in 1000 mL of water). Bacterial suspensions were prepared from the addition of saline solution (0.85% NaCl) to plates containing bacteria multiplied. These suspensions were centrifuged for 15 minutes at 10,000 rpm rotation. The supernatants obtained were reserved and stored in new flasks and a varying volume of saline solution was added to bacterial cells, depending on the assay to be performed and the isolate assessed, to adjust the concentrations. This procedure was performed in a spectrophotometer calibrated for 540 nm optical density. Initially, the effect of ingesting anti contaminated, component of the artificial diet of parental of larvae of S. frugiperda on the pathogenicity of the isolates Epi 7, Epi 11, Epi 13 and Nim 11. The bacterial suspensions were adjusted in a spectrophotometer to 0.1 absorbance, and they were used to treat fragments of new maize leaves. These fragments were offered individually for newly hatched caterpillars of S. frugiperda, from parents reared under an artificial diet or maize leaves. As caterpillars’ control were also from parental fed artificial diet or maize leaves and fed untreated maize leaves in the test. The duration and larval and pupal mortality, weight of male and female pupae and deformation of pupae and adults were evaluated. The intake of maize leaves or artificial diet by parents of S. frugiperda did not affect the pathogenicity of the bacterial isolates. After that, it was determined the number of bacterial cells present in each of the bacterial suspensions assessed aiming at standardization of the concentration of these pathogens in the assays were evaluated. These two components were used for the immersion of pieces of maize leaves in two assays individually carried out. For both assays, the fragments of treated leaves were transferred to glass tubes together with a newly hatched caterpillar of S. frugiperda. The caterpillars of the control received untreated maize leaves. The duration and mortality of larval and pupae, weight of male and female pupae, and deformation of pupae and adults were evaluated. All the evaluated bacterial isolates affected the survival and biology of newly-hatched larvae of S. frugiperda, however, Epi 13 and Nim 14 were the most virulent to that insect. The supernatants of Epi 1, Epi 7, Epi 12, Epi 13, Nim 11, Nim 12, Nim 14 and Nim 15 isolates reduced the survival of larvae of S. frugiperda. Bacteria isolated from the neem plant are promising for use in caterpillars of S. frugiperda management programs.
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